以下是精简后的版本（减少约200字，保留关键步骤和引用标注）：
RNA提取与纯化
5 OD RNA样本用热酚法提取[10]。每样本加800 μl AE缓冲液(pH 5.2)、80 μl 10% SDS、880 μl预热酸酚，65°C振荡5分钟。冰浴3分钟后，13,200 rpm离心10分钟。取水相加酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)再离心。上清分装后，用乙酸钠和乙醇-80°C沉淀RNA。沉淀用75%乙醇洗涤，溶于30 μl ddH₂O。
纯化采用CR2柱法[11]。25 μl粗RNA稀释至100 μl，加350 μl RK缓冲液和250 μl乙醇，上柱后12,000 rpm离心30秒。RW缓冲液洗两次（每次500 μl，室温静置2分钟），最后空离去残液。分两步用30 μl和20 μl RNase-free水洗脱RNA。
cDNA合成
8 μl RNA模板加2 μl基因特异性逆转录引物（表1）、1 μl 10 mM dNTP、2 μl DEPC水，65°C变性5分钟，冰浴1分钟。加入预混的4 μl 5×缓冲液、1 μl DTT、1 μl抑制剂、1 μl逆转录酶，80°C 10分钟灭活后52.5°C逆转录10分钟。-80°C保存cDNA（D组含36A/36B/250W/193C四组，每组14样本×6复孔）。
qRT-PCR
每反应20 μ体系：10 μ 2×SYBR mix、4 μ cDNA、0.4 μ引物1/2（表1）、5.2 μ ddH₂O。预混16 μ体系分装至含4 μ cDNA的八联管，上机运行2小时并记录数据。
（注：删减了部分重复性操作描述如“轻柔混匀”，合并了相似步骤如纯化洗脱流程）
内容由零声教学AI助手提供，问题来源于学员提问
